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徠卡生物顯微鏡的超薄切片的定量x射線微區(qū)分析

更新時間:2012-11-23   點擊次數(shù):2718次

徠卡生物顯微鏡的超薄切片的定量x射線微區(qū)分析

徠卡生物顯微鏡不論外源佐的還是體內(nèi)存在的物質(zhì),作x射線微區(qū)分析時,除鑒定其成分外,還需給出“量”。這“量”(即濃度)有相對及兩種表示方法。

徠卡生物顯微鏡為測試成分的濃度,L為測試成分的峰高tl為在分析區(qū)域內(nèi)全部質(zhì)量的x射線強度,即連續(xù)射線的高度。由于有機物與無機物的平均原子密度相差甚大,用超路切片100一200nm標(biāo)本做分析時使出現(xiàn)了困難。因為待測試成分的質(zhì)量相對很少.而來源于超薄切片,支持膜、金屬網(wǎng)及標(biāo)本托等的背景(即連續(xù)X射線)十分強,連續(xù)譜的計數(shù)與其成分原于序數(shù)的平方z”成正比,因而高原子序數(shù)的元素產(chǎn)生的連續(xù)語的強度要比有機物的連續(xù)諾強度大得多。如Oq(z=76)的連續(xù)諾強度比相同濃度的生物學(xué)材料的連續(xù)譜強度高100倍。因此便集中考慮以超薄切片(其主要成分為C,N.O和H)為背景,而不再考慮支持網(wǎng),金屬托等的影響。于是人們制各組成與所測試的樣品相似的標(biāo)準(zhǔn)樣品,將測試樣品的特征x射線強度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品特征x射線強度在相同測試條件下比較,便是徠卡生物顯微鏡超簿切片標(biāo)本定量方法的基本原則。

徠卡生物顯微鏡為測試成分濃度,r5為標(biāo)準(zhǔn)樣品的已知濃度,入及人分別為測試成分和已知成分的峰高。由于在生物學(xué)標(biāo)本的較輕元素的濃度范圍內(nèi),可以不做原子序數(shù)對連續(xù)譜效應(yīng)的校正,因此上式可寫為

徠卡生物顯微鏡一個重要的問題便是定Pd值,基本方法是制各生物標(biāo)本的類似物。要求該類似物勻質(zhì),含有與生物標(biāo)本同樣的輕元素。外加一種元素r其濃度范圍在生物標(biāo)本所含的范圍內(nèi),在電子轟擊時應(yīng)穩(wěn)定,而且在100nm厚的切片中應(yīng)有化學(xué)上的均勻性。這種生物標(biāo)本類似物很多,如Na和k(NaCNS及KCNS)镕子Sp毗樹脂,700C聚合后超薄切片,所余的聚合塊涪于酵以定Na及K的濃度。再如牛血清白蛋白,牛胰島京和Phmnun中均共價結(jié)合有已知化學(xué)計量濃度的5和尸。這些蛋白可做為含5和尸的生物標(biāo)本類似鉤”。但這些生物標(biāo)本類似韌并不能包羅生物標(biāo)本中所有的成分,往往是“類似物”。幸運的是如果已知某一種元素的H,其它所有元素的H/‘均能間接求出。因為一切生物材料的元素的連續(xù)譜都在相同的能帶中,元素的u/x值有如此關(guān)。因此若徠卡生物顯微鏡測量出其它萊一元素的此g2了(Ej),其u7*很容易求出。當(dāng)持測元素約Iyf已知后,將x射線信號輸入檢測系統(tǒng),經(jīng)計算機處理后,便可直接給出元素的濃度(m01A8)。

備注:徠卡生物顯微鏡的超薄切片的定量x射線微區(qū)分析部分文章由北京中儀光科科技發(fā)展有限公司編輯上傳。

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